在众多的生物实验室,分子生物学检测方法如PCR因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境污染的控制也极为严格。面对众多的污染源,比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、质粒污染、PCR扩增产物污染、还有极容易忽视的气溶胶污染,莎车实验室耗材,气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,在空气与液体面摩擦时,比如在操作时比较剧烈地摇动反应管,实验室耗材采购,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,电子实验室耗材,因而由其造成的污染是一个非常重要而被忽视的污染源。
扩增检测实验室原则上分为4个单独的工作区域:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,实验室试剂耗材,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行。
虽然这些污染对PCR实验结果的影响已经受到了广泛重视,多数实验室对污染控制都采取了各种办法,比如定期大扫除清理、划分操作区域、试剂分装、操作谨慎、重复实验、多角度验证结果。但是微量的核酸片段就能被扩增,所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能够杜绝和避免的,关键是需要从源头控制。
对结果有效性不利影响的因素可能包括但不限于:微生物污染、灰尘、电磁干扰、辐射、湿度、供电、温度、声音和震动。举个例子:一般使用的玻璃量器如移液管、容量瓶使用温度都是在20℃,温度过低或过高都会影响配制试剂浓度的度。实验室的温度必须控制在(20±5)℃范围内才能确保检测数据的误差在可控范围内。除此之外实验室还应保持良好的内务管理,减少环境对检测结果的影响。